1999年11月,分子生物学研究室建立于同位素楼四楼原骨科研究所的生物化学实验室、创伤外科研究所的办公室和实验室,共三间实验室,科室人员有吕振华。最初为分子生物学研究室,目标是提高医院临床工作的基因诊断、基因治疗水平,建立全院的开放实验室。同时为医院各临床科室以分子生物学为主要内容的临床基础研究提供一个研究平台,以及各临床专业研究生的临床实验基地。
2000年血液科、皮肤科、骨科和普外科等专业研究生开始进入实验室,开始进行细胞培养､组织培养、组织工程学和分子杂交等实验工作。
2001 年常用实验室设备基本到位;开展了部分细胞因子全长基因的克隆、重组表达质粒载体的构建、原核表达、体外转录cRNA探针的制备、核酸分子原位杂交、PCR-RFLP、半定量PCR 等方面的试验研究工作;建立了HLAI类 [类分子的组织配型工作(PCR-SSP)。科室人员有吕振华、隋爱华。
• 413 •
2002 年科研创新工作:①开展了乙型肝炎病毒DNA分子的定量检测(HBV-DNA)、丙型肝炎病毒 RNA 分子的定量检测(HCV-RNA),同时开展了肾移植配型工作(HLA)。
②建立了成套的原核表达系统。全年共完成175人次 HBV-DNA及14人次 HLA 检测,创收 159188 元;近20位硕士研究生、4位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作;协助院血液科、肾内科、泌尿外科、风湿免疫科、内分泌科、麻醉科､眼科､胸外科、普通外科、眼科等科室的各种来源课题的部分实验室工作。科室人员有吕振华、刘相萍、隋爱华。
2003 年更名为分子生物学中心实验室。实验室添置层流柜和鼠笼,开展裸鼠养殖。
常规开展 HBV-DNA及HLA检测。全年共完成1870人次 HBV-DNA检测,创收189117元。科研创新工作:①成功获得多个具有较大临床应用价值的细胞因子克隆化基因,为以后开展工作打下了良好的基础。②建立了成套的真核表达系统。近28位硕士研究生、3位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。协助院血液科、肾内科、泌尿外科、风湿免疫科、内分泌科、麻醉科､眼科､胸外科､骨外科、普通外科、眼科､妇科､产科、神经内科等科室的各种来源课题的部分实验室工作。科室人员有吕振华、刘相萍、隋爱华、杨堃。
2004 年,开展了 EB病毒的荧光定量PCR测定工作,常规开展HBV-DNA及HLA检测。全年共完成 2179人次荧光定量PCR测定工作及7人次 HLA检测,创收226428元。
科研创新工作:①为来实验室的学生自行设计常规PCR所用引物,保证了实验定量检测组织中 RNA 及DNA 表达的顺利进行。②开展了巨细胞病毒、结核杆菌、风疹病毒等病原微生物的 PCR 快速检测,为临床科室和病人进行服务,获得了协作临床科室得满意和好评。
③自行成功构建带有绿色荧光蛋白的重组载体,为以后的实验奠定了基础。近35位硕士研究生、4位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。协助院血液科、肾内科、泌尿外科、风湿免疫科、内分泌科、麻醉科、眼科、胸外科、骨外科、普通外科、眼科､妇科、产科、神经内科等科室的各种来源课题的部分实验室工作。刘相萍完成病原生物专业的硕士研究生课程,通过答辩获得硕士学位。
2005年,全年共完成2179人次 HBV-DNA检测,创收181386.5元(8月份开始检测1人份由100元降为50元)。开展了以下几方面的科研创新工作:①自己设计荧光探针,定量检测组织中和转染的细胞中的RNA及DNA的表达。②本年度建立了多药耐药基因MDR 的定量检测方法,将为肿瘤科、儿科、血液科等临床科室的药物使用和研究提供帮助。近 44 位硕士研究生、2位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。
隋爱华通过专升本入学考试。杨通过研究生入学考试,考取免疫学专业硕士研究生。
2006年,全年共完成3635人次 HBV-DNA及5人次 HLA 检测,共创收 187188 元(12月份开始检测1人份由50元升为80元)。科研创新方面:①实验室开展了RNA干扰工作,合成的小RNA干扰片段达到了预期的干扰效果。②开展了对构建的重组真核质粒载体在真核细胞中表达等工作,获得了满意的实验结果,对开展新的基因诊断、治疗技术提供了有力的保证。③完成酵母载体的构建,以期获得高水平的蛋白表达。④完成双基因表达载体的构建及在真核细胞中表达的荧光定量检测等。近48位硕士研究生、3位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。
• 414 •
2007 年,全年共完成3635 人次 HBV-DNA 及 25 人次 HLA 检测,共创收 245102 元(从10月份开始,HBV-DNA检测工作由于没有达标的PCR实验室而停做)。科研创新方面:①完成腺相关病毒载体的改造,构建了重组腺相关病毒载体并成功包装得到高滴度的病毒颗粒,为基因的稳定持续表达奠定了基础。②开展了表达 shRNA重组载体的构建工作,转染真核细胞后成功观测到干扰效果。③完成外源性 microRNA表达载体构建以及其体外逆转乳腺癌耐药细胞多药耐药性实验研究。④协助妇产科开展卫生部一项新项目的研究:荧光原位杂交技术检测子宫颈上皮脱落细胞 hTERC 基因扩增的临床应用研究,该技术在临床上的应用将为宫颈癌的筛查、早期诊断及预后评估提供新的途径。隋爱华通过专升本毕业考试,获得本科学历。近57位硕士研究生,4位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。2007年9月科室主任吕振华因病去世。
主要设备:美国 Beckman公司DU-640 紫外分光光度计及流动池配件､凝胶扫描配件,德国 Sigma 公司3K-30(1-13 高速冷冻台式离心机),台式微量离心机,德国 Eppendorf公司 Mastercycler gradient 梯度PCR仪,美国Forma公司低温冰箱(空气摇床),美国 Bio-Rad公司水平-垂直电泳系统,450型酶标仪,英国Huber公司 polystat 循环水浴箱,法国Vilber Lourmat 凝胶透射(交联)成像分析系统,德国 Memmert 二氧化碳细胞培养箱、Roche 公司的 Lightcycler 荧光定量PCR、净化工作台、电冰箱等仪器、3K15 低温离心机、UPS电源、E501-FL 显微镜和组织成像系统、德国 Eppendorf 公司的梯度PCR仪(384 孔)和电穿孔仪及水平电泳槽等。
主要承担科研课题12项,第一作者发表论文13篇,科研项目获奖5项。
各项规章制度:《分子生物学实验中心工作制度》《年度发展计划》《分子生物学实验中心诚信服务举措》《分子生物学实验中心岗位描述》、《研究生进入分子生物学中心实验室工作须知》《研究生进入分子生物学中心实验室科研工作登记表》、《消毒隔离制度》、《消毒片使用规定》、《样品管理规定》《仪器设备管理制度》《质控管理制度》。
实验室在院领导和科研处的支持帮助下,从筹建到现在,科室人员从1位发展到4位(现为3位)。几年来经过全科的共同努力,在基因诊断和基因治疗的实验室工作方面进行了大量的准备及具体工作,如相关文献检索和翻译、实验方法的摸索和建立、与临床相关科室的沟通和协作探讨等。由于科室人员多是非临床专业的,有较高的实验技术水平,创造了良好的实验平台,正逐年增多地接纳各临床专业博士、硕士研究生进入实验室进行分子遗传学、基因组学、分子克隆、基因表达、免疫组织化学和生物化学等方面的工作。到目前为止,已有风湿免疫科、肝胆外科、胸外科、神经外科、神经内科、病理科､肿瘤科、消化内科、心内科、心外科、口腔科、耳鼻喉科、肾内科、眼科、妇科、产科、皮肤科、美容科、血液科、骨科、普外科、急诊外科、创伤外科、脑外科、小儿科和泌尿外科等科室的硕士研究生进入实验室并在实验室老师的指导下顺利完成课题。科研上与临床科室密切合作,申请及参与了多项高水平科研课题(如国家自然科学基金2项、省自然科学基金2项等)。
1999年11月,分子生物学研究室建立于同位素楼四楼原骨科研究所的生物化学实验室、创伤外科研究所的办公室和实验室,共三间实验室,科室人员有吕振华。最初为分子生物学研究室,目标是提高医院临床工作的基因诊断、基因治疗水平,建立全院的开放实验室。同时为医院各临床科室以分子生物学为主要内容的临床基础研究提供一个研究平台,以及各临床专业研究生的临床实验基地。
2000年血液科、皮肤科、骨科和普外科等专业研究生开始进入实验室,开始进行细胞培养､组织培养、组织工程学和分子杂交等实验工作。
2001 年常用实验室设备基本到位;开展了部分细胞因子全长基因的克隆、重组表达质粒载体的构建、原核表达、体外转录cRNA探针的制备、核酸分子原位杂交、PCR-RFLP、半定量PCR 等方面的试验研究工作;建立了HLAI类 [类分子的组织配型工作(PCR-SSP)。科室人员有吕振华、隋爱华。
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2002 年科研创新工作:①开展了乙型肝炎病毒DNA分子的定量检测(HBV-DNA)、丙型肝炎病毒 RNA 分子的定量检测(HCV-RNA),同时开展了肾移植配型工作(HLA)。
②建立了成套的原核表达系统。全年共完成175人次 HBV-DNA及14人次 HLA 检测,创收 159188 元;近20位硕士研究生、4位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作;协助院血液科、肾内科、泌尿外科、风湿免疫科、内分泌科、麻醉科､眼科､胸外科、普通外科、眼科等科室的各种来源课题的部分实验室工作。科室人员有吕振华、刘相萍、隋爱华。
2003 年更名为分子生物学中心实验室。实验室添置层流柜和鼠笼,开展裸鼠养殖。
常规开展 HBV-DNA及HLA检测。全年共完成1870人次 HBV-DNA检测,创收189117元。科研创新工作:①成功获得多个具有较大临床应用价值的细胞因子克隆化基因,为以后开展工作打下了良好的基础。②建立了成套的真核表达系统。近28位硕士研究生、3位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。协助院血液科、肾内科、泌尿外科、风湿免疫科、内分泌科、麻醉科､眼科､胸外科､骨外科、普通外科、眼科､妇科､产科、神经内科等科室的各种来源课题的部分实验室工作。科室人员有吕振华、刘相萍、隋爱华、杨堃。
2004 年,开展了 EB病毒的荧光定量PCR测定工作,常规开展HBV-DNA及HLA检测。全年共完成 2179人次荧光定量PCR测定工作及7人次 HLA检测,创收226428元。
科研创新工作:①为来实验室的学生自行设计常规PCR所用引物,保证了实验定量检测组织中 RNA 及DNA 表达的顺利进行。②开展了巨细胞病毒、结核杆菌、风疹病毒等病原微生物的 PCR 快速检测,为临床科室和病人进行服务,获得了协作临床科室得满意和好评。
③自行成功构建带有绿色荧光蛋白的重组载体,为以后的实验奠定了基础。近35位硕士研究生、4位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。协助院血液科、肾内科、泌尿外科、风湿免疫科、内分泌科、麻醉科、眼科、胸外科、骨外科、普通外科、眼科､妇科、产科、神经内科等科室的各种来源课题的部分实验室工作。刘相萍完成病原生物专业的硕士研究生课程,通过答辩获得硕士学位。
2005年,全年共完成2179人次 HBV-DNA检测,创收181386.5元(8月份开始检测1人份由100元降为50元)。开展了以下几方面的科研创新工作:①自己设计荧光探针,定量检测组织中和转染的细胞中的RNA及DNA的表达。②本年度建立了多药耐药基因MDR 的定量检测方法,将为肿瘤科、儿科、血液科等临床科室的药物使用和研究提供帮助。近 44 位硕士研究生、2位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。
隋爱华通过专升本入学考试。杨通过研究生入学考试,考取免疫学专业硕士研究生。
2006年,全年共完成3635人次 HBV-DNA及5人次 HLA 检测,共创收 187188 元(12月份开始检测1人份由50元升为80元)。科研创新方面:①实验室开展了RNA干扰工作,合成的小RNA干扰片段达到了预期的干扰效果。②开展了对构建的重组真核质粒载体在真核细胞中表达等工作,获得了满意的实验结果,对开展新的基因诊断、治疗技术提供了有力的保证。③完成酵母载体的构建,以期获得高水平的蛋白表达。④完成双基因表达载体的构建及在真核细胞中表达的荧光定量检测等。近48位硕士研究生、3位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。
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2007 年,全年共完成3635 人次 HBV-DNA 及 25 人次 HLA 检测,共创收 245102 元(从10月份开始,HBV-DNA检测工作由于没有达标的PCR实验室而停做)。科研创新方面:①完成腺相关病毒载体的改造,构建了重组腺相关病毒载体并成功包装得到高滴度的病毒颗粒,为基因的稳定持续表达奠定了基础。②开展了表达 shRNA重组载体的构建工作,转染真核细胞后成功观测到干扰效果。③完成外源性 microRNA表达载体构建以及其体外逆转乳腺癌耐药细胞多药耐药性实验研究。④协助妇产科开展卫生部一项新项目的研究:荧光原位杂交技术检测子宫颈上皮脱落细胞 hTERC 基因扩增的临床应用研究,该技术在临床上的应用将为宫颈癌的筛查、早期诊断及预后评估提供新的途径。隋爱华通过专升本毕业考试,获得本科学历。近57位硕士研究生,4位博士生在实验室完成了论文的全部或大部实验研究工作。2007年9月科室主任吕振华因病去世。
主要设备:美国 Beckman公司DU-640 紫外分光光度计及流动池配件､凝胶扫描配件,德国 Sigma 公司3K-30(1-13 高速冷冻台式离心机),台式微量离心机,德国 Eppendorf公司 Mastercycler gradient 梯度PCR仪,美国Forma公司低温冰箱(空气摇床),美国 Bio-Rad公司水平-垂直电泳系统,450型酶标仪,英国Huber公司 polystat 循环水浴箱,法国Vilber Lourmat 凝胶透射(交联)成像分析系统,德国 Memmert 二氧化碳细胞培养箱、Roche 公司的 Lightcycler 荧光定量PCR、净化工作台、电冰箱等仪器、3K15 低温离心机、UPS电源、E501-FL 显微镜和组织成像系统、德国 Eppendorf 公司的梯度PCR仪(384 孔)和电穿孔仪及水平电泳槽等。
主要承担科研课题12项,第一作者发表论文13篇,科研项目获奖5项。
各项规章制度:《分子生物学实验中心工作制度》《年度发展计划》《分子生物学实验中心诚信服务举措》《分子生物学实验中心岗位描述》、《研究生进入分子生物学中心实验室工作须知》《研究生进入分子生物学中心实验室科研工作登记表》、《消毒隔离制度》、《消毒片使用规定》、《样品管理规定》《仪器设备管理制度》《质控管理制度》。
实验室在院领导和科研处的支持帮助下,从筹建到现在,科室人员从1位发展到4位(现为3位)。几年来经过全科的共同努力,在基因诊断和基因治疗的实验室工作方面进行了大量的准备及具体工作,如相关文献检索和翻译、实验方法的摸索和建立、与临床相关科室的沟通和协作探讨等。由于科室人员多是非临床专业的,有较高的实验技术水平,创造了良好的实验平台,正逐年增多地接纳各临床专业博士、硕士研究生进入实验室进行分子遗传学、基因组学、分子克隆、基因表达、免疫组织化学和生物化学等方面的工作。到目前为止,已有风湿免疫科、肝胆外科、胸外科、神经外科、神经内科、病理科､肿瘤科、消化内科、心内科、心外科、口腔科、耳鼻喉科、肾内科、眼科、妇科、产科、皮肤科、美容科、血液科、骨科、普外科、急诊外科、创伤外科、脑外科、小儿科和泌尿外科等科室的硕士研究生进入实验室并在实验室老师的指导下顺利完成课题。科研上与临床科室密切合作,申请及参与了多项高水平科研课题(如国家自然科学基金2项、省自然科学基金2项等)。